Basis tips foar it krimpen fan Cell Cultures

Basis tips foar it krimpen fan Cell Cultures

Sellen trochgean mei har metabolisme by normale groeiaktiviteiten, dy't de dielname freget oer ferskate propsjes. Doe't de temperatuer ûnder -70-° C-cops sakket, stopje mei it wurk. Dêrom, yn in omjouwing mei ekstreem lege temperatueren, kinne sellen har metabolike aktiviteiten stopje en in sliepende steat yn gean wêrtroch langer op lange termyn kin tastean.

1. Eksperimintele materialen

Basismateriaal:

Basis kultuer medium

Serum (konvinsjonele FBS / NBS)

Ultrapure Workbench

Sterile Dimethyl Sulfoxide (DMSO)

Sterile pbs fosfaat buffer sâltoplossing

Pipetting Gun

Elektryske pipetting-gewear

Tarieding fan 'e eksperiminten

a) tarieding fan 'e beferzen oplossing:

Algemiene sellen: 55% basale medium + 40% bovine serum (fbs / nbs) + 5% dmso

Vital sellen: 90% Bovine Serum (FBS / NBS) + 10% DMSO

Aliquot de tariede CryopReRing-oplossing yn in 15 ML-sintraal buis [Nest] en bewarje om 4 ° C foar letter gebrûk.

(b) tarieding fan sellen om beferzen te wêzen:

Foardat jo de sellen befrijje, selektearje sellen mei goede groei-status en yn 'e logaritmyske groei faze en ferfange se mei frisse medium 12-24 oeren foardat jo befrijd hawwe om selstân te behâlden.

2. Eksperimintele proseduere

1. OBEVEN FERGESE DE TENDEN FAN DE SELLEN OM FROZEN te wêzen, wat is sawat 80% ~ 90%. Brûk in pipette-gewear om it âlde medium te aspirearjen, Sterile PBS tafoegje om de sellen 1-2 kear te waskjen, en it oerbleaune medium ferwiderje yn 'e kultuer omjouwing.

2. Foegje in passende hoemannichte trypsin of Digestive sollen ta om de trypsin de sellen yn te gean, en se yn 'e ynkubator pleatse foar spiisfertarring. Sjoch de tastân fan 'e sellen ûnder de mikroskoop: It sitoplasma is ynlutsen en de sellen wurde net langer ferbûn ta lekkens. Op dit punt hawwe de stopoplossing tafoegje om it ferwurkjen fan it spiisfertarring te stopjen.

3. Bubels bubs de sellen mei in tip om in sel te foarmjen en sintraal te foarmjen en sintraal de sel-ophinging op 1000 RPM foar 3-5 minuten.

Wiskje de Supernatant, foegje in passende hoemannichte befrijende oplossing ta, en sêft pipette om de sellen unifoarm te tellen. Oanpasse de sellundens mei CryopResion-medium om de definitive tichtheid 5 × 106 / ml ~ 1 × 107 / ml te meitsjen.

4. Brûk in pipette-gewear om de kryogenyske buizen te skieden neffens de ferwachte kapasiteit, en brûk in automatyske capping-masine om te kapjen en segel.

5. It standert CryopReRing-programma is in koelkoelens fan -1 ° C oant -2 ° C / min om beferzen te wêzen, kin stadichoan beferzen wurde neffens de folgjende stappen: keamertemperatuer → 4 ° C (20min) → - 20 ° C (30min) → -80 ° C (Oernacht) → Opslach op lange termyn yn floeibere stikjes.

It kin ek direkt wurde opslein yn in fryker by -80 ° C oernacht en dan oerbrocht nei floeibere stikjes foar opslach.

Yongyue Medical is in high-tech Enterprise spesjalisaasje yn R & D, produksje en ferkeap fan biomedyske konsuminten. Pipette tips, pipetes, PCR plaat, tillefoanprodukten en oare biologyske biologyske laboratoaren. Yongyue Medical is jo fertrouwen en kar wurdich! Wolkom om te rieplachtsjen!